Nested PCR utilizando a gota espessa como fonte do DNA de Plasmodium: uma alternativa para análise de coleções de lâminas de sangue arquivadas

O estudo teve como objetivo avaliar um protocolo de nested PCR, utilizando a gota espessa (GE) corada por Giemsa como fonte de DNA de Plasmodium. Um total de 138 amostras de GE de pacientes de cinco municípios do Estado do Pará (Região Amazônica, Brasil) foi incluído neste estudo. Essas amostras foram classificadas em três grupos (grupo 1: 85 lâminas de GE positivas e negativas para Plasmodium armazenadas em caixa plástica por cinco anos; grupo 2: 28 lâminas de GE positivas e negativas para Plasmodium armazenadas em caixa de madeira por 10 anos; e grupo 3: 25 lâminas de GE positivas para Trypanosoma cruzi e negativas para Plasmodium) e submetidas à extração de DNA com Chelex-100. Posteriormente, as amostras de DNA extraídas foram quantificadas e a integridade verificada por eletroforese. O protocolo de nested PCR foi realizado para detectar as espécies de Plasmodium. Os resultados foram então comparados com os da microscopia e os parâmetros estatísticos calculados pelo screening test. As amostras de DNA de todos os grupos apresentaram quantidade e níveis de pureza adequados para realização de PCR, mas a avaliação da integridade mostrou 19 amostras degradadas do grupo 2. Pelo nested PCR, esse grupo mostrou baixa sensibilidade (29,63%) e acurácia (32,14%), enquanto que as amostras do grupo 1 apresentaram 100% de sensibilidade e 97,65% de acurácia. Os resultados desta pesquisa apontam que as amostras armazenadas até cinco anos podem ser úteis como fonte de DNA de Plasmodium para que o nested PCR identifique as espécies desse gênero, sendo uma alternativa importante para apoiar estudos retrospectivos.

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